gold感受态,

🗣 SL提问: gold感受态

✍️ Ai批改: Gold感受态细胞（Gold Competent Cells）是一种常用于分子克隆和基因工程的高效大肠杆菌（*Escherichia coli*）感受态细胞，由美国Agilent Technologies（原Stratagene）公司开发。这类细胞以其高转化效率、稳定性和对复杂DNA（如大质粒或连接产物）的良好兼容性而闻名。

主要特点
1、高转化效率
通常可达 10⁹ cfu/μg DNA（如pUC19质粒），适合克隆低拷贝或大片段DNA。
对连接产物（如TA克隆、Gibson Assembly产物）的转化效率较高。

2、基因型优化
缺失核酸内切酶（*endA1*突变），减少DNA降解。
携带*recA1*突变，降低重组风险，提高质粒稳定性。
*lacZΔM15*突变支持蓝白斑筛选（需配合X-gal/IPTG）。

3、应用广泛
常规质粒转化、文库构建、长片段克隆（如10 kb）。
兼容TA克隆、无缝克隆（Gibson Assembly、In-Fusion等）。

实验注意事项
1、储存与复苏
需保存在 -80℃，避免反复冻融。
解冻时置于冰上，轻弹混匀（勿涡旋），快速操作以减少效率损失。

2、转化步骤
加入DNA后冰浴30分钟 → 42℃热激45秒 → 冰浴2分钟 → 加入SOC培养基复苏（37℃摇床1小时）。
涂板时使用预热的含抗生素平板。

3、常见问题
低效率：检查DNA质量、热激时间/温度、细胞活性。
假阳性：确保抗生素浓度正确，避免卫星菌落。

与其他感受态细胞的对比
| 类型 | 转化效率（cfu/μg） | 适用场景 |
|
| Gold | ~10⁹ | 复杂克隆、大质粒、文库构建 |
| DH5α | ~10⁷–10⁸ | 常规质粒克隆 |
| TOP10 | ~10⁹ | 高拷贝质粒、表达载体 |
| BL21(DE3) | ~10⁶–10⁷ | 蛋白表达（T7系统） |

推荐使用场景
需要高转化效率的实验（如文库构建）。
克隆困难片段（如GC-rich、重复序列）。
商业试剂盒（如pGEM-T Easy载体）常推荐Gold细胞。

如需进一步优化实验，可尝试调整DNA用量或使用电转感受态细胞（效率更高）。